HSA：FcRn中和抗体筛选化学发光检测试剂盒：FcRn-lgG半衰期延长工程化抗体筛选

新生儿Fc受体FcRn是一种由FCGRT基因编码的Fcγ受体与β2-微球蛋白B2M组成的异源二聚体蛋白。FcRn在超过25种组织中表达脾脏和肠道中水平最高其核心功能是结合并保护单体免疫球蛋白GIgG通过回收IgG并将其再循环至血液循环中从而显著延长IgG的半衰期。此外FcRn还参与血清白蛋白HSA的稳态调节。在胎盘组织中FcRn介导母体IgG向胎儿的主动转运为新生儿提供被动免疫。FcRn的这一独特生物学功能使其成为药物开发的双重靶点一方面通过工程化改造治疗性抗体的Fc区以增强其对FcRn的亲和力可延长抗体半衰期提高药效——例如用于治疗COVID-19的抗体鸡尾酒Evusheld以及TNF-α/Fc融合蛋白Enbrel均利用了FcRn介导的再循环机制。另一方面在自身免疫性疾病中致病性自身抗体是疾病进展的关键驱动因素。阻断FcRn与IgG的相互作用可加速包括致病性自身抗体在内的总IgG清除。基于这一策略首个靶向FcRn的药物efgartigimod已获FDA批准用于治疗重症肌无力为这一治疗路径提供了概念验证。为满足研究人员在FcRn靶向药物筛选中的需求由艾美捷代理的BPS Bioscience 公司推出的 HSA:FcRn 中和抗体筛选化学发光检测试剂盒货号82151提供了一套完整、灵敏、高通量兼容的解决方案。该试剂盒专门用于筛选和表征能够阻断人血清白蛋白HSA与人FcRn相互作用的中和抗体或阻断剂适用于自身免疫病治疗药物及半衰期延长型抗体药物的早期发现。图1HSA:FcRn中和抗体筛选化学发光检测试剂盒工作原理示意图。一个96孔板或384孔板被FcRn蛋白包被。封闭后用封闭剂或中和抗体对板进行预孵育。随后与生物素-HSA孵育用链霉亲和素-HRP处理板然后加入ELISA ECL底物以产生化学发光该化学发光可使用化学发光仪进行测量。化学发光信号与HSA与FcRn的结合成比例。一、试剂盒核心组分与设计优势1. 即用型完整组分操作简便试剂盒提供所有必需成分生物素化人血清白蛋白Biotinylated HSA作为配体。重组人FcRn蛋白FCGRT/B2M包含FCGRT的24-297位氨基酸及B2M的21-119位氨基酸保留天然结合活性。链霉亲和素-辣根过氧化物酶Streptavidin-HRP用于化学发光检测。检测缓冲液及洗涤缓冲液优化反应条件降低背景。用户无需额外准备蛋白或酶即可直接开展实验。2. 化学发光检测高灵敏度与宽动态范围本试剂盒采用化学发光ELISA原理将FcRn蛋白包被于微孔板加入生物素化HSA和待测中和抗体或阻断剂。如果抗体能阻断HSA与FcRn的结合则后续结合的Streptavidin-HRP减少化学发光信号降低。发光强度与HSA-FcRn结合程度成正比与中和抗体的活性成反比。化学发光法具有背景低、信噪比高、不受化合物自发荧光干扰等优点特别适用于复杂样本的筛选。3. 96孔/384孔双规格兼容高通量筛选试剂盒提供96孔100次反应和384孔400次反应两种规格可与自动化移液工作站无缝对接实现高通量筛选HTS。用户可在单次实验中完成数百至数千个候选抗体或化合物的初筛快速识别能够阻断HSA-FcRn相互作用的中和抗体。4. 内置阳性对照可选与严格质控虽然产品描述中未明确列出阳性对照抗体但试剂盒设计允许用户使用已知的FcRn阻断剂如efgartigimod或工程化Fc片段作为阳性对照以验证实验体系的有效性。BPS Bioscience可提供推荐对照品。二、应用场景与科研价值1. 自身免疫病治疗性中和抗体的筛选FcRn抑制剂通过加速致病性IgG的清除已在重症肌无力、寻常型天疱疮、免疫性血小板减少症等自身免疫病中显示出临床潜力。利用该试剂盒研究人员可以筛选能够阻断HSA-FcRn相互作用的单克隆抗体、纳米抗体或小分子化合物。对阳性克隆进行亲和力成熟和表位竞争分析。测定候选药物的IC50比较不同阻断剂的效力。2. 延长治疗性抗体半衰期的工程化筛选通过Fc区突变如M252Y/S254T/T256E即YTE突变增强抗体对FcRn的亲和力可显著延长抗体半衰期减少给药频率。该试剂盒可用于评估工程化Fc变体与FcRn的结合能力使用生物素化HSA作为竞争配体。筛选具有高亲和力但不阻断HSA结合的Fc变体因为HSA与IgG结合FcRn的位点部分重叠但不同需要根据具体设计选择。优化双特异性抗体或Fc融合蛋白的Fc区序列。3. 药物联合应用的机制研究FcRn不仅结合IgG也结合HSA。一些疾病状态下如肾病综合征白蛋白水平异常可能影响FcRn的药物转运功能。利用该试剂盒可以研究病理浓度的HSA对FcRn-IgG结合的竞争影响。同时靶向IgG和HSA结合位点的双功能阻断剂的协同效应。三、技术参数与操作要点规格与储存检测格式化学发光96孔或384孔板。物种人源。靶点HSA 与 FcRn (FCGRT/B2M)。运输温度-80°C干冰。稳定性按照指示储存各组分保存条件详见说明书试剂盒在收货后6个月内保持最佳性能。监管状态仅限研究使用Research Use Only不可用于临床诊断。操作流程概述典型步骤1. 包被将FcRn蛋白稀释于包被缓冲液加入微孔板4°C过夜或37°C孵育2小时。2. 封闭加入封闭缓冲液室温孵育1小时。3. 加样同时加入生物素化HSA和梯度稀释的待测中和抗体或阻断剂室温孵育1-2小时。4. 检测加入Streptavidin-HRP室温孵育30分钟洗涤后加入化学发光底物立即读取发光值。5. 数据分析计算抑制率拟合IC50曲线。注意事项避免反复冻融FcRn蛋白和生物素化HSA应分装保存于-80°C避免多次冻融导致活性下降。DMSO兼容性如果筛选小分子化合物确保终浓度DMSO不超过1%通常可兼容。阳性对照强烈建议使用已知阻断剂如efgartigimod或抗FcRn抗体作为阳性对照以监控实验质量。非特异性结合设置无FcRn包被的对照孔评估待测抗体的非特异性结合。四、文献参考Chaudhury C., et al., 2006 Biochemistry. 45 (15): 4983-90.DallAcqua W.F., et al., 2002 J Immunol. 169(9): 5171-80.Sand K.M.K., et al., 2014 J Biol Chem. 289 (24):17228-39.