亲和纯化兔抗DDX6抗体，亲和层析精制，精准识别内源靶标

一、产品概述DDX6DEAD-box解旋酶6是DEAD-box蛋白家族成员之一该家族蛋白含有多个保守基序其中包括高度保守的DEAD天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸氨基酸序列基序。DEAD-box蛋白的主要功能是作为ATP依赖性RNA解旋酶在前体mRNA剪接、RNA合成、RNA降解、RNA输出、RNA翻译、RNA二级结构形成、核糖体生物发生以及核糖核蛋白RNP复合物组装等RNA代谢与功能的各个环节中发挥重要作用。研究表明DDX6通过在翻译水平调控基因表达正向调节细胞生长。本文介绍的由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的A300-460A型兔抗DDX6多克隆抗体货号A300-460A由美国生产经抗原亲和纯化适用于小鼠及人源样本的免疫组化IHC、免疫沉淀IP和免疫印迹WB检测。二、核心规格参数参数 | 详细信息靶标 | DDX6DEAD-box解旋酶6反应性 | 小鼠人应用 | IHC, IP, WB宿主 | 兔克隆性 | 多克隆形式 | 全IgG免疫原 | 人DDX6蛋白第1–50位氨基酸N末端同型 | IgG标记 | 非偶联纯度 | 抗原亲和纯化抗原物种 | 人浓度 | 200 ug/ml储存条件 | 2 - 8 °C保质期 | 收货后1年缓冲液 | Tris缓冲盐水含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠三、免疫原与识别表位本抗体采用表位特异性亲和纯化工艺制备。将针对DDX6蛋白N末端区域的特异性表位固定在固相支持物上从抗血清中亲和捕获并纯化特异性抗体。A300-460A所识别的表位位于人DDX6蛋白第1位至第50位氨基酸N末端区域。编号依据Swiss-Prot数据库条目P26196GeneID 1656。选择N末端区域作为免疫原可有效避免与其它DEAD-box家族成员其保守区域主要位于中部和C末端的交叉反应从而提高抗体的特异性。四、浓度测定方法免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定。标准条件下1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光度A280为1.4。本抗体浓度为200 ug/ml即0.2 mg/ml使用时需根据实验需要计算相应体积。五、应用与实验条件通用说明所有免疫印迹实验均采用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育推荐4°C。推荐稀释比例与用量应用 | 推荐稀释比例/用量 | 特殊说明免疫组化IHC | 1:100 - 1:500 | 推荐使用Tris-EDTA缓冲液pH 9.0进行抗原修复FFPE组织切片免疫沉淀IP | 6 ug/mg 裂解物 | 按抗体质量计算体积需相应调整免疫印迹WB | 1:5000 - 1:15000 | 较宽的工作范围建议从1:5000开始优化六、二抗选择说明细胞裂解物免疫印迹使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体货号A120-101P。该二抗可同时识别兔IgG的重链和轻链。免疫沉淀产物的免疫印迹使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清货号S100-020。免疫沉淀后样本经变性处理会释放抗体的重链约55 kDa和轻链约25 kDa。采用轻链特异性二抗可有效消除重链信号的干扰提高目标蛋白DDX6分子量约54 kDa的检测灵敏度。值得注意的是DDX6的分子量54 kDa与抗体轻链25 kDa和重链55 kDa均有重叠尤其是重链信号可能完全掩盖DDX6条带。因此在检测免疫沉淀产物中的DDX6时强烈建议使用抗兔轻链特异性二抗以避免重链干扰。七、产品使用与储存储存注意事项抗体应储存于2 - 8°C请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性下降。本抗体缓冲液中含有0.1% BSA作为稳定蛋白以及0.09%叠氮化钠作为防腐剂。稳定性与保质期自收货之日起在推荐的储存条件下保质期为1年。因浓度较低200 ug/ml建议分装保存避免多次开盖导致的污染和蒸发。浓度特别提醒与其他常见抗体如1000 ug/ml相比本抗体浓度较低使用时需注意免疫沉淀推荐用量为6 ug抗体/mg裂解物。以200 ug/ml浓度计算每mg裂解物需加入30 ul抗体。免疫印迹以1:5000稀释度为例需将1 ul抗体稀释至5 ml抗体稀释液中。以1:15000稀释度计算1 ul抗体可稀释至15 ml经济性良好。八、质量控制每批次产品均经过抗原亲和纯化验证确保抗体特异性。生产过程中使用固定于固相支持物上的DDX6 N末端特异性表位第1-50位氨基酸进行纯化。建议用户在使用新批次时进行稀释梯度验证尤其是WB和IHC以确定最佳工作浓度。因本抗体浓度较低建议收货后立即分装为单次使用量如5-10 ul/管避免反复冻融及污染。别名ATP依赖性RNA解旋酶p54、DEAD-box解旋酶6、DEAD-box蛋白6、HLR2、原癌基因RCK、P54