共焦显微镜使用

x.1 细胞培养

x.2 样品制备

以细菌为例，我们使用荧光染色细菌，静置15分钟。

15分钟后我们使用实验室的专用培养皿，选择吸收100uL的溶液滴在在培养皿中心。

x.3 显微镜使用

我们按照1, 2, 3, 4的顺序打开显微镜，

打开电脑，

打开LAS_X软件，点OK进入软件。将显微镜顶部移开，使用酒精清洗一次，擦干。

选择合适的物镜放大倍数，我们在显微镜操作面板第三部分，点选两下来选择物镜的合适的放大倍数，常用为40X。需要根据放大倍数是否为油镜，来选择是否在物镜上涂膜油。根据观测时间长短选择合适的面板（有可以充二氧化碳和水的板子，和夹住物体的板子），

在粗调前提下，移动显微镜的Z轴观察物镜，直到物镜刚好碰到培养皿，油层会稍微绽开一点点，注意观察显微镜第四个部分的显微镜高度选项，

刚好顶住后，我们将显微镜顶部盖上，进入软件，我们在Configuration - Laser Config中选择需要的合适的激光，常见为打开488nm激光和552nm激光，

进入Acquire，点选SEQ，添加需要观察的窗口数量，一般为两个Seq，其中Seq1为绿光，Seq2为红光+明场图像，

将UI变为经典版本，在上面的光是选择该Seq中照射的光的强度和波长，在下面的光是该Seq中接受的波长范围，

我们调到TLD，将明场图像打开，

一切参数配置好后，我们点左下的Live开始操作。点选明场图像，我们通过转动Gain来调整图像显示的亮度（极限是1k2，但是建议都旋转在1k以下的范围），一般移动到亮场图像变灰白变亮便可，

观察亮场图像，我们移动Z轴高低，配合粗调和细调来进行调节，直到亮场图像出现颗粒状，那可能是细胞的样子，

这时候切换到我们的荧光图像，我们先调整荧光图像的Gain值使得图像能够看到有一点颜色。由于荧光图像和亮场图像不在一个焦点平面，所以我们还需要细调Z轴向，使得荧光图像也呈现细胞的样子，

找到需要的位置和细胞后，我们点snap进行拍照。我们也可以选择Z-stack来拍Z轴向的所有图片，点Begin后选择需要的厚度，点End确定厚度，再点选Start进行有厚度的快照。

我们在Project面板中能看到我们刚才拍摄的图片，我们点3D viewer查看3D厚度的Stack图片，

我们也可以在3D viewer这个插件中保存不同格式的图片，例如TIF，JPG一类图片，

x.4 关闭显微镜

关闭显微镜即在x.3中打开显微镜，调整参数中的逆操作一样。先关闭Seq中的不同激光，OFF后；进入Configure，关闭Configure中的激光。

将培养皿用酒精洗净，注意将物镜下移还原